軟骨細(xì)胞是軟骨組織中的主要細(xì)胞成分。位于軟骨陷窩中。軟骨細(xì)胞的核小，呈圓形或橢圓形，有1至數(shù)個(gè)核仁，胞質(zhì)略嗜堿性。細(xì)胞形狀依軟骨組織而異：在透明軟骨，靠近軟骨膜的細(xì)胞呈橢圓形，其長(zhǎng)軸與軟骨表面平行，深部的細(xì)胞逐漸變?yōu)閳A形或卵圓形，常常兩個(gè)或多個(gè)聚集成群，稱(chēng)為同源細(xì)胞群；在彈性軟骨，細(xì)胞的形態(tài)基本上與透明軟骨的相似；在纖維軟骨，細(xì)胞略呈卵圓形，夾在膠原纖維束之間，單個(gè)存在、成對(duì)存在或排列成單行。大鼠軟骨細(xì)胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類(lèi)固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。

　　1）大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的取材、培養(yǎng)及細(xì)胞一般生物活性測(cè)定

　　取4～5周齡，體重185～200g的SD大鼠，斷頸處死，置于5%CO2混和氣體環(huán)境中，37℃恒溫箱內(nèi)單層培養(yǎng)，隔3d初次換液，8～10d達(dá)85%融合后進(jìn)行傳代。以臺(tái)盼藍(lán)染色法計(jì)算細(xì)胞活性?；钚约?xì)胞獲得率(個(gè)/g)=細(xì)胞總數(shù)/軟骨消化量。細(xì)胞存活率(%)=活性細(xì)胞總數(shù)/(活性細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))×100%。細(xì)胞貼壁率(%)=(接種細(xì)胞總數(shù)-漂浮細(xì)胞數(shù))×100%。軟骨細(xì)胞群體倍增時(shí)間(doubblingtimeDT)的測(cè)定：DT=(t-t0)log2/(logn-logn0)。接種時(shí)培養(yǎng)時(shí)間t0，細(xì)胞計(jì)數(shù)為n0；收集時(shí)培養(yǎng)時(shí)間為t，細(xì)胞計(jì)數(shù)為n。

　　2）倒置相差顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀(guān)察

　　取每代貼壁軟骨細(xì)胞于倒置相差顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。倒置相差顯微鏡觀(guān)察：原代軟骨細(xì)胞9～12h部分貼壁，大部分在24h時(shí)完成貼壁，部分細(xì)胞開(kāi)始伸展，細(xì)胞體積較小，呈多角形，均勻散在生長(zhǎng)，48h內(nèi)基本上鋪展成三角或多角形；7～10d達(dá)到90%融合形成單層細(xì)胞，細(xì)胞仍呈多角形或短梭形，細(xì)胞排列緊密，折光性強(qiáng)。傳代細(xì)胞貼壁時(shí)間為2～4h，第1～2代細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，3～4d細(xì)胞即可融合，細(xì)胞呈多角形小部分細(xì)胞形態(tài)狹長(zhǎng)。第3代細(xì)胞形態(tài)逐漸變狹長(zhǎng)，折光性減弱。第5代以后，均呈長(zhǎng)梭型老化。8、9代后細(xì)胞梭狀鋪平，鏡下長(zhǎng)而大，折光差，部分細(xì)胞脫落，形態(tài)不規(guī)則。

　　3）軟骨細(xì)胞透射電鏡觀(guān)察胰酶消化各代次軟骨細(xì)胞，離心后先于離心管培養(yǎng)3d，送福建醫(yī)大電鏡室制片觀(guān)察。經(jīng)離心管培養(yǎng)3d后，固定標(biāo)本進(jìn)行電鏡技術(shù)觀(guān)察，原代P0培養(yǎng)軟骨細(xì)胞為卵圓形或圓形，細(xì)胞核清晰，較多異染色質(zhì)分布于核膜邊緣和核內(nèi)。胞漿內(nèi)有較多糖原顆粒和分泌囊泡，胞漿內(nèi)含有豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體。細(xì)胞周?chē)图?xì)胞間可見(jiàn)網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)及少量膠原纖維和蛋白聚糖，但是結(jié)構(gòu)較稀疏，排列較亂，缺乏緊密的膠原網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。傳代后P1軟骨細(xì)胞體積逐漸增大，胞漿內(nèi)細(xì)胞器減少。細(xì)胞外膠原纖維增粗，量變少，蛋白聚糖進(jìn)一步減少，末發(fā)現(xiàn)凋亡軟骨細(xì)胞。P2代軟骨細(xì)胞為三角形或卵圓形，細(xì)胞核及核仁清晰，少許異染色質(zhì)沿核膜均勻分布，核內(nèi)以常染色質(zhì)為主。胞漿內(nèi)有較多糖原顆粒和分泌囊泡，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線(xiàn)粒體較豐富。